海藻糖6磷酸酯酶(TPP)測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注? 意: 正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
海藻糖又稱為漏蘆糖、蕈糖,是由兩個葡萄糖分子組成的一個非還原性雙糖,能夠在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環境條件下在細胞表面形成獨特的保護膜,有效地保護生物分子結構不被破壞,從而維持生命體的生命過程和生物特征。
植物體內主要以葡萄糖為底物合成海藻糖,海藻糖-6-磷酸酯酶 (trehalose 6-phosphate phosphatase,TPP)是該途徑中海藻糖合成關鍵酶之一,該反應首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖生成中間產物6-磷酸海藻糖,再在TPP的作用下去磷酸化,生成海藻糖。
測定原理:
TPP 催化海藻糖-6-磷酸產生海藻糖,同時釋放出磷酸根,使用鉬銻抗比色法測定。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品測定的準備:
1、細胞的處理:收集或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復 30 次);8000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織的處理:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),冰浴中勻漿。8000g ,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
